استاد مشاور: خانم دکتر بستان رودی

برای رعایت حریم خصوصی نام نگارنده درج نمی شود تکه هایی از متن به عنوان نمونه : (ممکن است هنگام انتقال از فایل اصلی به داخل سایت بعضی متون به هم بریزد یا بعضی نمادها و اشکال درج نشود ولی در فایل دانلودی همه چیز مرتب و کامل است) فهرست مطالب عنوان                           صفحه فصل اول: کلیات تحقیق 1-1 مقدمه. 2 1-2 اهداف پژوهش… 3 1-3 مشخصات گیاهشناسی اطلسی.. 3 1-4 شرایط كاشت اطلسی.. 5 1-5 فلزهای سنگین.. 5 1-5-1 کادمیوم. 5 1-5-1-1 اثرات کادمیوم بر روی سلامتی.. 6 1-5-1-2 اثرات زیست محیطی کادمیوم 7 1-5-2 کبالت… 8 1-5-2-1 اثرات کبالت بر سلامتی انسان. 9 1-5-2-2 تاثیرات زیست محیطی کبالت… ……..11 1-6 کشت بافت… 12 1-7 ریزازدیادی.. 13 1-8 کاربرد‌های تجاری ریزازدیادی.. 14 1-9 کشت بافت و مهندسی ژنتیک گیاهی.. 15 فصل دوم: مروری بر منابع 2-1- فلزهای سنگین.. 17 2-1-1 تأثیر فلزهای سنگین بر روی گیاهان. 17 فصل سوم: مواد و روش­ها 3-1- تهیه ی محلول های ذخیره و محیط کشت… 35 3-1-1- محلول های مادری نمک های پرمصرف با غلظت 10 برابر (10×) 35 3-1-2- محلول های مادری نمک های کم مصرف با غلظت 1000 برابر (1000×) 36 3-1-3- محلول مادری و با غلظت 10 برابر (10×) 37 3-1-4- محلول مادری با غلظت 1000 برابر (1000×) 37 3-1-5- محلول مادری ویتامین ها و گلایسین 100 برابر (100×): 38 3-1-6 محلول مادری هورمون ها 38 3-1-6-1 اکسین‌ها 38 3-1-6-2 سیتوکینین‌ها 38 3-1-7- تهیه CdCl₂برای تیمار. 39 3-1-8 تهیه یک لیتر محیط کشت پایه MS از محلول های مادری.. 39 3-1-9 عامل ژله ای …40 3-2 روش تهیه گیاه پایه استریل.. 40 3-2-1مراحل سترون سازی.. 40 3-2-1-1 سترون سازی بذرها 40 3-2-1-2- سترون سازی محیط وسایل کار. 40 3-3 تولید گیاهان سترون جهت تیمارهای مختلف… 41 3-4 کشت گیاه در محیط های تیماری.. 41 3-5 آنالیز رشد. 42 3-6 سنجش رنگیزه های فتوسنتزی (1957 Arnon,): 44 3-7 سنجش كربوهیدراتها (1978 Kochert,): 45 3-7-1 اندازه گیری قندهای محلول. 45 3-7-2 اندازه گیری قندهای نامحلول (نشاسته) 46 3-8 سنجش پرولین ( Bates et al , 1973) 47 3-9 سنجش فعالیتهای آنزیمی.. 48 3-9-1 سنجش آنزیم پراكسیداز (1989 Koroi, ) 48 3-9-2 سنجش آنزیم كاتالاز (1955 Chance, ) 49 3-10 سنجش پروتئین ها , 1951).Lowry et al) 49 فصل چهارم: نتایج 4-1 اثر غلظت‌های مختلف کلرید کبالت بر رشد جدا کشت‌های دو گره‌ای.. 53 4-2- اثر غلظت‌های مختلف کلرید کادمیوم بر رشد جدا کشت‌های دو گره‌ای….54 4-3 نتایج مربوط به اثرات غلظت‌های مختلف کلرید کبالت و کلرید کادمیوم بر گیاه اطلسی (Petunia hybrida) پس از انتقال به محیط پایه MS.. 56 4-3-1 تغییرات شاخص‌های رشد در گیاه 35 روزه تحت تیمارهای مختلف کلرید کادمیوم و کلرید کبالت… 56 4-3-1-1 تغییرات وزن تر اندام هوایی.. 56 4-3-1-2 تغییرات طول ساقه. 57 4-3-1-3 تغییرات وزن خشک اندام هوایی.. 59 4-3-1-4 تغییرات سطح برگ‌ها..61 4-3-1-5 تغییرات تعداد برگ… 64 4-3-1-6 تغییرات فاصله میانگرهی.. 66 4-3-1-7 تغییرات وزن تر کل برگ‌ها 66 4-3-1-8 تغییرات وزن خشک کل برگ‌ها 67 4-3-1-9 سرعت رشد گیاه (C.G.R): 67 4-3-1-10 وزن مخصوص برگ (SLW): 68 4-3-1-11 سرعت رشد نسبی (RGR): 68 4-3-1-12 میزان جذب خالص (N.A.R) 69 4-3-1-13 نسبت سطح برگی (L.A.R)….71 4-3-1-14 تغیرات میانگین نسبت سطح ویژه برگی (S.L.A) 73 4-4-2 تغیرات بیوشیمیایی.. 75 4-4-2-1 تغییرات مقدار کلروفیل ها: 75 4-4-2-2 تغییرات فعالیت آنزیم ها: 80 4-4-2-2-1 تغییرات مقدار فعالیت آنزیم کاتالاز در اندام هوایی: 80 4-4-2-2-2 تغییرات مقدار فعالیت آنزیم پراکسیداز در اندام هوایی: 82 4-4-2-3 تغییرات مقدار قندهای محلول و نامحلول کل اندام هوایی: 84 4-4-2-4 تغییرات میزان پروتئین های کل اندام هوایی: 87 4-4-2-5 تغییرات مقدار پرولین اندام هوایی: 89 فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری 5-1 نتیجه گیری و پیشنهادات..  92 5-2 اثر غلظت‌های مختلف كلرید كادمیوم و كلرید كبالت بر روی رشد گیاه 92 5-3 اثر غلظت‌های مختلف كلرید كبالت و كلرید كادمیوم بر میزان كلروفیل‌ها 95 5-4 اثر غلظت‌های مختلف کلرید کبالت و کلرید کادمیوم بر میزان پروتئن‌های کل گیاه 98 5-5 اثر غلظت‌های مختلف کلرید کبالت و کلرید کادمیوم بر میزان پرولین در گیاه اطلسی.. 98 5-6 اثر غلظت‌های مختلف کلرید کبالت و کلرید کادمیوم بر میزان فعالیت آنزیم‌های کاتالاز و پراکسیداز…. 100 5-7 اثر غلظت‌های مختلف کلرید کبالت و کلرید کادمیوم بر میزان قند محلول و نامحلول در گیاه اطلسی……. 101 5-8 نتیجه‌گیری کلی………………………………………………………………………………………………………………..102 5-9 پیشنهادات……………………………………………………………………………………………………………………….104 منابع. …105 منابع فارسی.. 106 منابع لاتین.. 108 پیوست ها………………………………………………………………………………………………………………….115 چکیده در این تحقیق اثر غلظت های مختلف کادمیوم و کبالت بر روی گیاه اطلسی بررسی شد .گیاه اطلسی (Petunia hybrida L. ) ، عضوی از خانواده ی Solanaceae محسوب می شود که بومی آمریکای جنوبی بوده و به عنوان یک محصول پرورشی گل زینتی و صادراتی با ارزش شناخته می شود . ابتدا گیاهان اطلسی در محیط های کشت آگار (محیط کشت MS) کشت داده شدند و بعد جدا کشت های ساقه ای اطلسی به محیط های حاوی غلظت های مختلف کلرید کادمیوم ( mmol/L 049/0 ، 021/0 ، 01/0 ، 0) و کلرید کبالت mmol/L) 38/0 ، 19/0 ، 12/0 ، 096/0 ، 0 ) منتقل شده و بعد از 35 روز تاثیرهای این عناصر ، از نظر مرفولوژی و فیزیولوژی بررسی شد . در مورد کادمیوم ، مشاهده شد که با افزایش غلظت های CdCl₂، مقدار کلروفیل کاهش چشمگیری را نشان داد . هم چنین با افزایش غلظت CdCl₂ شاهد افزایش مقدار پرولین ، پروتئین و قندهای محلول و نامحلول بودیم . با افزایش غلظت این فلز ، آنزیم های پراکسیداز و کاتالاز هم فزایش یافتند . هم چنین غلظت های بالای کادمیوم ( مخصوصا 021/0 و 049/0 میلی مول بر لیتر ) باعث بی رنگی برگ هاو کاهش وزن تر و خشک و اندازه سطح برگ شد . گیاهانی که در معرض غلظت های بالای CdCl₂ بودند ، رشد بسیار کمتری داشتند نسبت به گیاهان فاقد CdCl_{2 . (} گیاه های اطلسی در محیط های فاقد CdCl₂ ، حدود 3/9 سانتی متر رشد کرده بودند ، در حالی که اطلسی های حاضر در mmol/L049/0 کادمیوم ، رشدی در حدود 3/1 سانتی متر را نشان دادند ). کبالت در غلظت های پایین (096/0میلی مول بر لیتر) باعث افزایش کلروفیل شده ولی در غلظت های بالاتر ( 38/0 میلی مول بر لیتر ) ، شاهد کاهش کلروفیل بودیم . با افزایش غلظت های کبالت ، آنزیم های کاتالاز و پراکسیداز افزایش یافتند و مقدار پرولین ابتدا کاهش و بعد افزایش چشمگیری را نشان داد ( مقدار پرولین در غلظت 096/0 میلی مول بر لیتر کاهش یافت ولی بعد از آن شاهد افزایش پرولین بودیم ) . علاوه بر این موارد ، افزایش غلظت های CoCl₂ ، باعث کاهش مقدار پروتئین و قندهای نا محلول شده ولی مقدار قندهای محلول افزایش یافت . هم چنین با افزایش غلظت کبالت شاهد کاهش رشد و کاهش تعداد شاخه ها بودیم ، به طوری که نمونه های فاقد CoCl₂ ، تعداد شاخه های بیشتری را نشان می دادند و سطح برگ هم نسبت به افزایش کبالت رشد منفی را نشان می داد . علاوه بر این موارد با افزایش غلظت CoCl₂ شاهد کاهش وزن تر و خشک اطلسی بودیم. کلید واژه : CdCl₂ ، CoCl₂ ، اطلسی ، کشت بافت