(در فایل دانلودی نام نویسنده موجود است)

تکه هایی از متن پایان نامه به عنوان نمونه :

(ممکن است هنگام انتقال از فایل اصلی به داخل سایت بعضی متون به هم بریزد یا بعضی نمادها و اشکال درج نشود ولی در فایل دانلودی همه چیز مرتب و کامل است)

فهرست مطالب
عنوان                                                                                                                               صفحه

چکیده…………………………………………………………………………………………………………………. 1

فصل اول : کلیات

مقدمه………………………………………………………………………………………………………………….. 4

سوالات تحقیق………………………………………………………………………………………………………. 8

فرضیه تحقیق………………………………………………………………………………………………………… 8

اهداف تحقیق………………………………………………………………………………………………………… 8

1-1-مشخصات آزاد ماهیان……………………………………………………………………………………… 9

1-1-1-رده بندی ماهی قزل آلا………………………………………………………………………………… 9

1-1-2-برخی ویژگی های مورفولوژیک و بیولوژیک ماهی قزل آلا………………………………….. 10

1-1-2-1-دستگاه گوارش و اندام های مرتبط…………………………………………………………….. 10

1-1-3-برخی ویژگی های ماهی قزل آلای رنگین کمان………………………………………………… 11

1-1-4-پراکنش ماهی قزل آلا در جهان و ایران…………………………………………………………… 11

1-1-5-بررسی آماری تولیدات پرورشی ماهی قزل آلا………………………………………………….. 12

1-2-پروبیوتیک چیست؟……………………………………………………………………………………….. 13

1-2-1-ضرورت استفاده از پروبیوتیک در آبزی پروری………………………………………………… 14

1-2-2-خطرات مصرف آنتی بیوتیک ها……………………………………………………………………. 16

1-2-3-نحوه ی عمل پروبیوتیک ها…………………………………………………………………………. 16

1-2-3-1-تولید ترکیبات ممانعت کننده…………………………………………………………………….. 16

1-2-3-2-رقابت بر سر مکان های اتصال…………………………………………………………………. 17

1-2-3-3-رقابت جهت جذب و مصرف مواد مغذی……………………………………………………. 17

1-2-4-معیارها و روشهای انتخاب پروبیوتیک……………………………………………………………. 18

1-2-4-1-جمع آوری اطلاعات زمینه ایی…………………………………………………………………. 19

1-2-4-2-تهیه پروبیوتیک…………………………………………………………………………………….. 19

1-2-4-3-ارزیابی توان پروبیوتیک در جهت خارج سازی سویه های بیماری زا………………….. 19

1-2-4-4-ارزیابی امکان بیماریزایی پروبیوتیک…………………………………………………………… 19

1-2-4-5-ارزیابی اثر پروبیوتیک بر میزبان………………………………………………………………… 20

1-2-4-6-تولید انبوه ، ارزیابی سود اقتصادی……………………………………………………………… 20

1-3- سیستم ایمنی در ماهیان………………………………………………………………………………….. 21

1-3-1-ایمنی غیر اختصاصی………………………………………………………………………………….. 21

1-3-1-1-ایمنی غیر اختصاصی (ترکیبات مایع )………………………………………………………… 22

1-3-1-1-1-لیزوزیم…………………………………………………………………………………………… 23

1-3-1-1-2-سیستم عامل مکمل (کمپلان ) در ماهیان………………………………………………….. 23

1-3-1-2-ایمنی غیر اختصاصی ( سلولی )……………………………………………………………….. 23

1-3-1-2-1-لنفوسیت ها……………………………………………………………………………………… 23

1-3-1-2-2-نوتروفیل ها……………………………………………………………………………………… 24

1-3-1-2-3-ائوزینوفیل ها……………………………………………………………………………………. 24

  http://zusa.ir/%d9%be%d8%a7%db%8c%d8%a7%d9%86-%d9%86%d8%a7%d9%85%d9%87-%d9%85%d8%af%db%8c%d8%b1%db%8c%d8%aa-%d8%b1%db%8c%d8%b3%da%a9-%d9%88-%da%a9%d8%a7%d8%b1%d8%a7%db%8c%db%8c-%d8%b4%d8%b9%d8%a8-%d8%a8%d8%a7%d9%86/

1-3-1-2-4-مونوسیت ها…………………………………………………………………………………….. 24

1-3-2-ایمنی اختصاصی……………………………………………………………………………………….. 24

1-3-2-1-ایمنی همورال……………………………………………………………………………………….. 25

1-3-2-1-1-ایمنوگلوبولین M (IgM)……………………………………………………………………. 25

1-3-2-2-ایمنی با واسطه ی سلولی ……………………………………………………………………….. 25

1-4-اهمیت مطالعات خون شناسی در ماهیان……………………………………………………………… 26

1-4-1-شاخص های خونی……………………………………………………………………………………. 26

1-4-1-1-گلبول های سفید (لکوسیت……………………………………………………………………… 26

1-4-1-2-گلبول های قرمز (اریتروسیت ، هموسیت )………………………………………………….. 26

1-4-1-3-شاخص های گلبول قرمز یا اندیس های خونی……………………………………………… 27

1-4-1-4-هماتوکریت………………………………………………………………………………………….. 27

1-4-1-5-هموگلوبین…………………………………………………………………………………………… 27

1-5-شاخص های بیوشیمیایی…………………………………………………………………………………. 27

1-5-1-پروتئین کل پلاسما و آلبومین……………………………………………………………………….. 27

1-5-2-گلوکز…………………………………………………………………………………………………….. 28

1-5-3-گلوتامیک پیرویک ترانس آمیناز……………………………………………………………………. 28

1-6-رابطه عوامل محیطی و میکروفلور دستگاه گوارش………………………………………………….. 28

1-7-باکتری های اسید لاکتیک (LAB)…………………………………………………………………….. 29

1-7-1-رده بندی علمی………………………………………………………………………………………… 30

فصل دوم: سابقه ی تحقیق

2- سابقه ی تحقیق……………………………………………………………………………………………….. 32

فصل سوم: مواد و روش ها

3-1-مکان و زمان انجام تحقیق……………………………………………………………………………….. 41

3-2-مکان پرورش……………………………………………………………………………………………….. 42

3-3-ذخیره سازی ، سازگاری و تقسیم بچه ماهیان……………………………………………………….. 43

3-4-پروبیوتیک مورد آزمایشLactobacillus plantarum………………………………………. 44

3-5-نحوه ی آماده سازی جیره غذایی……………………………………………………………………….. 44

3-6-زیست سنجی………………………………………………………………………………………………. 45

3-7-نحوه ی غذادهی……………………………………………………………………………………………. 45

3-8-بررسی عوامل فیزیکی و شیمیایی آب…………………………………………………………………. 46

3-9-بررسی پارامترهای خون شناسی………………………………………………………………………… 46

3-9-1-خون گیری و تهیه سرم……………………………………………………………………………….. 46

3-9-2-شاخص های خونی……………………………………………………………………………………. 47

3-9-2-1-شمارش گلبول های قرمز و سفید………………………………………………………………. 47

3-9-2-2-اندازه گیری هماتوکریت………………………………………………………………………….. 48

3-9-2-3-اندازه گیری هموگلوبین…………………………………………………………………………… 49

3-9-2-4-شاخص های گلبول قرمز………………………………………………………………………… 49

3-9-2-5-تشخیص افتراقی گلبول های سفید…………………………………………………………….. 50

3-10-فاکتورهای ایمنی…………………………………………………………………………………………. 51

3-10-1-شاخص های بیوشیمیایی ایمنی اختصاصی…………………………………………………….. 51

3-10-1-1-اندازه گیری ایمنو گلوبولینM (IgM)……………………………………………………… 51

3-10-2-شاخص های بیوشیمیایی ایمنی غیر اختصاصی……………………………………………….. 51

3-10-2-1-اندازه گیری فعلیت لیزوزیم……………………………………………………………………. 51

3-10-2-2-پروتئین کل سرم…………………………………………………………………………………. 52

3-11-روش انجام آزمایشات فلور باکتریایی روده در آزمایشگاه……………………………………… 52

3-11-1-روش آماده سازی محیط های کشت……………………………………………………………. 52

3-11-2-روش آماده سازی رقت های محلول روده و کشت اولیه…………………………………… 53

3-11-3-روش شمارش کلنی ها و تقسیم بندی آنها…………………………………………………….. 54

3-12-روش محاسبه شاخص های رشد…………………………………………………………………….. 54

3-12-1-اندازه گیری طول و وزن……………………………………………………………………………. 54

3-12-2-شاخص وضعیت…………………………………………………………………………………….. 55

3-12-3-درصد افزایش وزن………………………………………………………………………………….. 55

3-12-4-ضریب تبدیل غذایی………………………………………………………………………………… 55

3-12-5-ضریب رشد ویژه……………………………………………………………………………………. 55

3-12-6-میانگین رشد روزانه…………………………………………………………………………………. 55

3-12-7-شاخص کبدی………………………………………………………………………………………… 56

3-13-آماده سازی لاشه جهت تجزیه شیمیایی ……………………………………………………………. 56

3-14-تجزیه و تحلیل آماری………………………………………………………………………………….. 56

فصل چهارم: نتایج

4-نتایج………………………………………………………………………………………………………………. 58

4-1-نتایج حاصل از اندازه گیری عوامل محیطی…………………………………………………………… 58

4-1-1-دمای آب………………………………………………………………………………………………… 58

4-1-2-اکسیژن محلول آب……………………………………………………………………………………. 58

4-1-3-pH آب محیط پرورش……………………………………………………………………………… 58

4-2-نتایج حاصل از عملکرد رشد بچه ماهیان قزل آلا تحت تاثیر سطوح مختلف پروبیوتیک….. 59

4-2-1-اثر بر وزن نهایی……………………………………………………………………………………….. 59

4-2-2-اثر بر طول نهایی……………………………………………………………………………………….. 59

4-2-3-اثر بر ضریب تبدیل غذایی…………………………………………………………………………… 60

4-2-4-ضریب رشد ویژه………………………………………………………………………………………. 60

4-2-5-درصد افزایش وزن……………………………………………………………………………………. 61

4-2-6-میانگین رشد روزانه……………………………………………………………………………………. 61

4-2-7-میزان ضریب چاقی……………………………………………………………………………………. 62

4-3-فلور باکتریایی روده ماهیان تیمار و شاهد…………………………………………………………….. 62

4-3-1-میزان باکتریL.p در فلور روده قزل آلا در محیط کشت MRS…………………………… 62

4-3-2-توتال کانت باکتریایی روده ماهی قزل آلای رنگین کمان در محیط کشتTSA ……….. 62

4-4-نتایج حاصل از فاکتورهای خونی………………………………………………………………………. 63

4-4-1-تعداد گلبول های سفید خون………………………………………………………………………… 63

4-4-2-تعداد گلبول های قرمز خون…………………………………………………………………………. 64

4-4-3-غلظت هموگلوبین خون………………………………………………………………………………. 64

4-4-4-درصد هماتوکریت خون……………………………………………………………………………… 65

4-4-5-متوسط حجم گلبول قرمز…………………………………………………………………………….. 65

4-4-6-متوسط غلظت هموگلوبین سلولی………………………………………………………………….. 66

4-4-7-متوسط هموگلوبین گلبول قرمز……………………………………………………………………… 66

4-4-8-درصد لنفوسیت………………………………………………………………………………………… 67

4-4-9-مقادیر نوتروفیل………………………………………………………………………………………… 67

4-4-10-درصد منوسیت……………………………………………………………………………………….. 68

4-4-11-درصد ائوزینوفیل…………………………………………………………………………………….. 68

4-5-نتایج فاکتورهای سرم……………………………………………………………………………………… 68

4-5-1-میزان توتال ایمنوگلوبولین سرم خون………………………………………………………………. 69

4-5-2-میزان IgM……………………………………………………………………………………………… 69

4-5-3-میزان لیزوزیم سرم خون……………………………………………………………………………… 70

4-6-نتایج آنالیز لاشه…………………………………………………………………………………………….. 70

4-6-1-درصد رطوبت لاشه……………………………………………………………………………………. 70

4-6-2-درصد پروتئین لاشه…………………………………………………………………………………… 71

4-6-3-درصد چربی لاشه……………………………………………………………………………………… 71

4-6-4-درصد خاکستر لاشه…………………………………………………………………………………… 72

فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری

5-بحث……………………………………………………………………………………………………………… 74

5-1-عملکرد رشد………………………………………………………………………………………………… 74

5-2-فلور باکتریایی روده……………………………………………………………………………………….. 77

5-3-شاخص های خونی……………………………………………………………………………………….. 78

5-4-شاخص های ایمنی خون…………………………………………………………………………………. 81

5-4-1-لیزوزیم…………………………………………………………………………………………………… 81

5-4-2-ایمنوگلوبین IgM……………………………………………………………………………………… 83

5-5-آنالیز لاشه……………………………………………………………………………………………………. 84

5-6-جمع بندی…………………………………………………………………………………………………… 86

پیشنهادات ………………………………………………………………………………………………………….. 87

منابع………………………………………………………………………………………………………………….. 88

پیوست………………………………………………………………………………………………………………. 107

چکیده انگلیسی……………………………………………………………………………………………………. 121

فهرست جداول

عنوان                                                                                                               صفحه

جدول 3-1: آنالیز تقریبی خوراک استفاده شده در تغذیه بچه ماهیان مورد آزمون………………….. 44

جدول4-1: میانگین دما، اكسیژن محلول و pH آب در مقاطع زمانی مشخص در طول دوره بررسی  58

جدول 4-2- میانگین وزن نهایی (گرم)  در بچه ماهیان قزل آلا در تیمارهای مختلف……………. 59

جدول 4-3- میانگین طول نهایی (سانتیمتر)  در بچه ماهیان قزل آلا در تیمارهای مختلف………. 59

جدول 4-4- میانگین ضریب تبدیل غذایی بچه ماهیان قزل­آلا در تیمارهای مختلف………………. 60

جدول4-5- میانگین ضریب رشد ویژه بچه ماهیان قزل­آلا در تیمارهای مختلف……………………. 60

جدول4-6- میانگین درصد افزایش وزن بچه ماهیان قزل­آلا در تیمارهای مختلف…………………. 61

جدول 4-7- میانگین رشد روزانه بچه ماهیان قزل­آلا درتیمارهای مختلف…………………………… 61

جدول 4-8- میانگین میزان ضریب چاقی بچه ماهیان قزل­آلا درتیمارهای مختلف…………………. 62

جدول 4-9-میزان پروبیوتیک (لاکتوباسیلوس) در روده ماهیان قزل آلا در محیط کشت MRS.. 62

جدول4-10-شمارش کلی فلور باکتریایی در روده ماهیان قزل آلا در محیط کشت TSA……… 63

جدول 4-11-تعدادگلبول های سفید خونی قزل آلا در تیمارهای شاهد وآزمایشی در پایان60روز  63

جدول 4-12-تعدادگلبول های قرمز خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان60روز 64

جدول 4-13-  غلظت هموگلوبین g/dl))  خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان60

روز……………………………………………………………………………………………………………………. 64

جدول 4-14- درصد هماتوکریت % خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60 روز 65

جدول 4-15- متوسط حجم گلبول قرمز خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60

روز………………………………………………………………………………………………………………….. 65

جدول 4-16- متوسط غلظت هموگلوبین سلولی خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان

60 روز…………………………………………………………………………………………………………….. 66

جدول 4-17- متوسط هموگلوبین گلبول قرمز خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان

60 روز…………………………………………………………………………………………………………….. 66

جدول4-18- درصد لنفوسیت خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60 روز…. 67

جدول4-19-درصد نوتروفیل خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60 روز….. 67

جدول4-20-درصد منوسیت خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60 روز…… 68

جدول4-21-درصد ائوزینوفیل خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60 روز… 68

جدول4-22-توتال ایمنوگلوبولین سرم خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60

روز………………………………………………………………………………………………………………….. 69

جدول4-23-میزان IgM  سرم خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60 روز.. 69

جدول4-24-میزان لیزوزیم سرم خون قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60 روز. 70

جدول4-25-درصد رطوبت لاشه  قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60 روز…… 70

جدول4-26-درصد پروتئین لاشه  قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60 روز…… 71

جدول4-27-درصد چربی لاشه  قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60 روز…….. 71

جدول4-28-درصد خاکستر  لاشه  قزل آلا در تیمارهای شاهد و آزمایشی در پایان 60 روز…. 72

فهرست شکل ها

عنوان                                                                                                                   صفحه

شكل( 1-1) ماهی قزل آلای رنگین كمان ” Oncorhynchus mykiss”…………………………. 13

شکل (1-2) رابطه عوامل محیطی و میکروفلور دستگاه گوارش………………………………………… 29

شکل (3-1) موقعیت جغرافیایی گارگاه پرورش ماهی سردابی(قزل آلا) اشکرآب سیاهکل……… 41

شکل (3-2) نمایی از کارگاه پرورش ماهی سردابی اشکراب سیاهکل………………………………… 42

شکل (3-3) نمایی از کانال های بتونی پرورش و تیمار و تکرارها……………………………………. 43

شکل(3-4) پودر اولیه حاوی1011-1012…………………………………………………………………… 44

شکل(3-5) رقت های مختلف از106-1010………………………………………………………………. 44

شکل(3-6) غذای آماده و غنی شده با پروبیوتیک…………………………………………………………. 45

شکل (3-7) غذادهی روزانه بر اساس محاسبات روزانه………………………………………………….. 46

شکل (3-8) خونگیری از سیاهرگ در محل ساقه دمی…………………………………………………… 46

شکل (3-9) دستگاه سانتریفوژ و نحوه ی جداسازی سرم خون………………………………………… 47

شکل (3-10) دستگاه سانتریفیوژ هماتوکریت………………………………………………………………. 48

شکل (3-11) دستگاه اسپکتروفتو متر نور مرئی و UV…………………………………………………… 49

شکل(3-12): دستگاه اسپکتروفتومتر مدل 2100-VIS شرکت Unico آمریکا…………………….. 51

شکل(3-13)دستگاه Auto Analyzer  مدلBT- 1500……………………………………………. 52

شکل (3-14) نحوه ی آماده سازی محیط کشت TSA و MRS آگار………………………………… 53

شکل (3-15) برداشت روده و تهیه رقت های مختلف و کشت در پلت های TSAو MRS…… 54

شکل (3-16) نگهداری پلت ها در انکوباتور و شمارش باکتری ها…………………………………… 54

شکل (3-17) آماده سازی لاشه جهت تجزیه شیمیایی…………………………………………………… 56

چکیده
تحقیق حاضر به منظور ارزیابی تاثیر باکتری اسید لاکتیک Lactobacillu plantarum (KC426951) جداسازی شده از روده قزل آلای رنگین کمان بر فاکتورهای رشد ، فلور باکتریایی روده ،فاکتورهای خونی و ایمنی بچه ماهیان قزل آلای رنگین کمان (Oncorhynchus mykiss) در بهار و تابستان سال 1392انجام شد. بچه ماهیان قزل آلای رنگین کمان با میانگین وزن 24/2±56/3 به مدت 2 هفته با شرایط پرورشی محیطی در یک مرکز پرورش خصوصی ماهیان سردآبی (اشکرآب سیاهکل) در استان گیلان قبل از شروع آزمایش سازگار شدند . ماهیان در قالب یک طرح کاملا تصادفی به شش گروه شامل 540 قطعه بچه ماهی تقسیم شدند . پارامترهای کیفی آب شامل درجه حرارت ، مقدار اکسیژن محلول و pH به ترتیب 3/0±3/17 درجه سانتی گراد ،43/0±5/8 میلی گرم و 26/0±4/7 اندازه گیری شد .پنج گروه از ماهیان ( هر گروه شامل 90 ماهی) با جیره حاوی 106 (تیمار1) ، 107 (تیمار2) ، 108  (تیمار3) ، 109 (تیمار4) و1010 (تیمار5) cfu g-1  لاکتو باسیلوس پلانتاروم و گروه کنترل (شاهد) بدون جیره حاوی پروبیوتیک به مدت 60 روز تغذیه شدند . تغذیه ماهیان بر اساس 3 درصد بیوماس وزن بدن بصورت روزانه و برابر صورت پذیرفت. نتایج نشان داد که میزان وزن نهایی  ، طول نهایی، ضریب رشد  ، درصد افزایش وزن و میانگین رشد روزانه  در تیمار 2 بیشترین و در تیمار 5 کمترین مقدار و میزان ضریب تبدیل غذایی  در تیمار 2 کمترین و در تیمار 5 بیشترین را به خود اختصاص داده بودند(05/0> P). همچنین بالاترین میزان توتال لاکتیک اسید روده ماهیان قزل آلا در تیمار4 و در حالیکه کمترین مقدار مربوط به تیمار شاهد و بالاترین توتال کانت مربوط به تیمار 2 و کمترین تیمار 5 بدست آمد(05/0> P). فاکتورهای خونی: بالاترین سطوح گلبول های قرمز  در تیمار 5 (3/10408±3/898333) ، گلبولهای سفید در تیمار4 (4/702±3/10833) ، حجم گلبول های قرمز در تیمار 1(8/3±7/508) ، غلظت هموگلوبین در تیمار 5 (15/0±2/11) ، هماتوكریت در تیمار 5 (2±42) ،فراوانی لنفوسیت ها در گروه شاهد (53/1±67/69) ، فراوانی نوتروفیل ها در تیمار 5 (1±39) ، بدست آمد (05/0> P).

فاکتورهای ایمنی: بالاترین سطوح توتال ایمنوگلوبولین در تیمار 4 (15/1±33/20)  ، IgM در تیمار4 (65/2±39) و لیزوزیم در تیمار4(08/2±67/40) حاصل گردید(05/0> P) .حداکثر رطوبت لاشه مربوط به تیمار 3 ، درصد پروتئین مربوط به تیمار 4  ، و کمترین درصد چربی مربوط به تیمار شاهد می باشد (05/0> P). با توجه به نتایج بدست آمده در خصوص بکارگیری Lactobacillus plantarum می توان از آن به عنوان یک فاکتور مثبت جهت بهبود فلور باکتریایی روده ، عملکرد رشد ، شاخص های خونی ، ایمنی و ترکیب لاشه استفاده نمود.

کلمات کلیدی: قزل آلای رنگین کمان،باکتری اسید لاکتیک ، Lactobacillus plantarum ، رشد ، فلور باکتریایی، شاخص خونی، ایمنی ، لاشه

مقدمه