(در فایل دانلودی نام نویسنده موجود است)
تکه هایی از متن پایان نامه به عنوان نمونه :
(ممکن است هنگام انتقال از فایل اصلی به داخل سایت بعضی متون به هم بریزد یا بعضی نمادها و اشکال درج نشود ولی در فایل دانلودی همه چیز مرتب و کامل است)
فهرست مطالب
عنوان صفحه
چکیده…………………………………………………………………………………………………………………………………………1
فصل اول: کلیات
1-1- سرطان……………………………………………………………………………………………………………………………….3
1-2- علل سرطان………………………………………………………………………………………………………………………..3
1-3- خصوصیات سلول توموری…………………………………………………………………………………………………..5
1-4- روش های درمان سرطان……………………………………………………………………………………………………..6
1-5- تاریخچه ی شیمی درمانی…………………………………………………………………………………………………. 6
1-6- مقاومت دارویی…………………………………………………………………………………………………………………..7
1-7- فارماکولوژی پایه داروهای شیمی درمانی سرطان…………………………………………………………………….8
1-7-1- داروهای آلکیله کننده………………………………………………………………………………………………………8
1-7-2- آنتی متابولیتها……………………………………………………………………………………………………………..8
1-7-3- هورمونها……………………………………………………………………………………………………………………..9
1-7-4- فراوردههای گیاهی………………………………………………………………………………………………………….9
1-7-5- آنتی بیوتیکهای ضدسرطان…………………………………………………………………………………………..10
1-7-5-1- اکتینومایسین…………………………………………………………………………………………………………..11
1-7-5-1-1- داکتینومایسین……………………………………………………………………………………………………..11
1-7-5-2-آنتراسیکلین………………………………………………………………………………………………………………13
1-7-5-2-1-دانوروبیسین………………………………………………………………………………………………………….14
1-7-5-2-2-دوکسوروبیسین هیدروکلراید…………………………………………………………………………………..16
1-7-5-3- میترامایسین………………………………………………………………………………………………………………17
1-7-5-4 بلئومایسین سولفات…………………………………………………………………………………………………….19
1-7-5-5- میتومایسینها……………………………………………………………………………………………………………21
1-7-5-5-1 میترامایسین C………………………………………………………………………………………………………..22
1-7-5-6- استرپتوزوستین…………………………………………………………………………………………………………22
1-8-سرطان ریه………………………………………………………………………………………………………………………..23
1-8-1- علائم سرطان ریه……………………………………………………………………………………………………….. 26
1-8-2- سرطان در ایران…………………………………………………………………………………………………………… 26
1-9-اکتینومیستها…………………………………………………………………………………………………………………….28
1-9-1-متابولیتهای ثانویهی اکتینومیستها………………………………………………………………………………….30
1-10-هدف از پژوهش………………………………………………………………………………………………………………33
فصل دوم: پیشنهی تحقیق
فصل سوم: مواد و روشها
3-1- ترکیبات استفاده شده………………………………………………………………………………………………………….39
3-2- دستگاه های استفاده شده……………………………………………………………………………………………………42
3-3- سویههای اکتینومیست………………………………………………………………………………………………………..43
3-4- آمادهسازی محیط کشت تولید اسپور باکتری………………………………………………………………………….43
3-5- آمادهسازی محیط پیش کشت………………………………………………………………………………………………44
3-6- آمادهسازی محیط کشت تخمیر……………………………………………………………………………………………44
3-7- احیا و کشت سویه…………………………………………………………………………………………………………….45
3-8- تهیه پیش کشت……………………………………………………………………………………………………………… 45
3-9- تولید متابولیتها………………………………………………………………………………………………………………45
3-10- استخراج متابولیتها………………………………………………………………………………………………………45
3-11- نگهداری عصارهها………………………………………………………………………………………………………..46
3-12- غربالگری اولیه، ارزیابی فعالیت سمیت……………………………………………………………………………46
3-12-1- کشت آرتمیا……………………………………………………………………………………………………………..46
3-12-2- آزمون ارزیابی سمیت در آرتمیا…………………………………………………………………………………..47
3-13- غربالگری ثانویه، ارزیابی سمیت در کشت سلولی……………………………………………………………..48
3-13-1- انتخاب دودمان سلولی…………………………………………………………………………………………….. 48
3-13-1-1 محیط کشت………………………………………………………………………………………………………….49
3-13-1-1-1- مراحل تهیه محیط کشت دودمان سلولی A549…………………………………………………..49
3-13-1-1-2-تجدیدکشت دودمان سلولی A549……………………………………………………………………..50
3-13-1-1-3- شمارش سلولها و بررسی میزان فعالیت سلول…………………………………………………..51
3-13-2- تهیه محلول تریپسین………………………………………………………………………………………………….52
3-14- آزمون MTT………………………………………………………………………………………………………………..53
3-15- شمارش سلول برای انجام آزمونMTT……………………………………………………………………………54
3-16- روش انجام آزمون MTT دراین پژوهش……………………………………………………………………….54
3-17- بررسی ریختشناسی سلولها تیمار شده با عصاره اکتینومیستها……………………………………..55
3-18- شناسایی سویههای منتخب اکتینومیست………………………………………………………………………….56
3-18-1- بررسی مورفولوژی میکروسکوپی……………………………………………………………………………. 56
3-18-2- بررسی میسلیومهای هوایی و آرایش زنجیره اسپوری……………………………………………………56
3-18-3- بررسی رشد میسلیومی در محیطISP2 broth………………………………………………………………56
3-19- مطالعه شیمیوتاکسونومی………………………………………………………………………………………………56
3-19-1- تهیه بیومس برای تعیین ایزومر دی آمینوپامیلیک اسید(DAP)……………………………………………56
3-19-2- تعیین ایزومر DAPموجود در دیواره سلولی…………………………………………………………………… 57
3-20- شناسایی توالی نوکلئوتیدی ژن 16S rRNA سویههای منتخب…………………………………………….. 58
3-20-1- تهیه محیط کشت Luria Broth(LB)……………………………………………………………………………..58
3-20-2- تهیه زیست توده برای مطالعات فیلوژنتیک……………………………………………………………………..59
3-20-3- استخراج DNA…………………………………………………………………………………………………………59
3-20-4- تائید بررسی کیفیت استخراج DNA………………………………………………………………………………61
3-20-4-1- تهیه ژل آگاروز……………………………………………………………………………………………………..61
3-20-4-1-1- تهیه بافر(TAE)Tris-Acetate-EDTA………………………………………………………………..61
3-20-5- انجام فرایند واکنش زنجیره پلیمراز(PCR)……………………………………………………………………..62
3-20-5-2- شرایط واکنش PCR………………………………………………………………………………………………62
3-20-5-3- بررسی محصولات PCR………………………………………………………………………………………..63
3-20-5-4- خالص سازی محصولات PCR……………………………………………………………………………….63
3-20-6- تعیین توالی نوکلئوتیدی قطعات تکثیر شده از ژن 16S rRNA………………………………………….63
3-20-7- مقایسه توالی نوکلئوتید ژن 16S rRNA سویههای اکتینومایست منتخب…………………………….63
فصل چهارم: نتایج
4-1- شرایط پیش تخمیر و تخمیر و میزان متابولیت تولید شده توسط40 سویه اکتینومیست بررسی شده در این پژوهش………………………………………………………………………………………………………………………………65
4-2- نتایج حاصل از تست ارزیابی سمیت متابولیتهای ثانویه………………………………………………………..68
4-3- نتایج مربوط به بررسی ریخت شناسی سلولها در تست سمیت سلولی………………………………….. 71
4-4- نتایج مربوط به تست سمیت سلولی با روش MTT……………………………………………………………….72
4-5- بررسی ریختشناسی سلولها پس از تیمار با عصاره سویهی اکتینومیستهای منتخب………………74
4-6- شناسایی اکتینومیستهای منتخب………………………………………………………………………………………..74
4-6-1- بررسی ریخت شناسی اکتینومیستهای منتخب…………………………………………………………………74
4-6-2- تعیین ایزومر DAP موجود در دیواره سلولی…………………………………………………………………… 76
4-6-3- بررسی فیلوژنتیکی اکتینومیستهای منتخب………………………………………………………………………77
4-6-3-1- تائید استخراجDNA اکتینومیستهای منتخب………………………………………………………………77
4-6-4- تائید استخراج ژن16S rRNA از ژل آگاروز……………………………………………………………………..77
4-6-4-1- نتایج مربوط به توالی خوانی ژن 16S rRNA……………………………………………………………….78
فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری
منابع……………………………………………………………………………………………………………………………………….. 91
چکیده انگلیسی…………………………………………………………………………………………………………………101
پیوستها………………………………………………………………………………………………………………………….102
فهرست جداول
عنوان صفحه
جدول 1‑1: میزان شیوع و مرگ و میر ناشی از انواع سرطان در هر دو جنس زن ومرد. 25
جدول 1‑2: تغییرات تنوع سرطان در ایران در طی سالهای 1376-1318.. 27
جدول 1‑3:گروههای مختلف اکتینومیستها 29
جدول 1‑4: تعدادی از متابولیتهای استخراج شده توسط اکتینومیستها 32
جدول 3‑1:مواد شیمایی استفاده شده 39
جدول 3‑2:دستگاههای استفاده شده 42
جدول 3‑3:ترکیبات محیط کشت ISP2 اصلاح شده 44
جدول 3‑4:ترکیبات محیط پیش تخمیر. 45
جدول 3‑5:نمکهای مورد نیاز برای تهیه آب نمک دریایی مصنوعی.. 46
جدول 3‑6:ترکیبات مورد استفاده درتهیه محیط کشت دودمان A549. 49
جدول 3‑7:ترکیبات محیط کشت… 58
جدول 4‑1:نتایج حاصل از مرحله ی تولید واستخراج متابولیتهای ثانویه. 64
جدول 4‑2:درصد کشندگی در عصارهها با محدوده اثری بین 40-59% (محدوده اثر خوب). 67
جدول 4‑3:درصد کشندگی در عصارهها با محدوده اثری بین 39-20% (محدوده اثر متوسط). 69
جدول 4‑4:درصد کشندگی در عصارهها با محدوده اثری بین 0-19% (محدوده اثرضعیف). 70
جدول 4‑5: نتایج مربوط به بررسی مرفولوژی سلول پس از تیمار با عصارهها 70
جدول 4‑6: نتایج مربوط به مقایسه مقدار جذب بین عصارهها با شاهد…………………………………………….. 72
جدول 4‑7: شماره دسترسی در Gene Bank ومیزان تشابه اکتینومیستهای منتخب با اکتینومیستهای ثبت شده براساس ترادف نوکلئوتیدهای ژن 16S rRNAدر ژنوم…………………………………………………………… 80
فهرست نمودارها
عنوان صفحه
نمودار 4‑1:مقایسه میانگین مقدار جذب بین عصارههای سویههایی که 05/0≥p داشتندبا شاهد(A549). 73
فهرست اشکال صفحه
شکل 1‑1: ساختمان شیمیایی داکتینومایسین.. 12
شکل 1‑2: ساختمان شیمیایی دانوروبیسین.. 14
شکل 1‑3: ساختمان شیمیایی دوکسوروبیسین.. 16
شکل 1‑4: ساختمان شیمیایی میترامایسین.. 17
شکل 1‑5:ساختمان شیمیایی بلئومایسین.. 18
شکل 1‑6:ساختمان شیمیایی میتومایسین.. 20
شکل 1‑7: ساختمان شیمیایی استرپتوزوستین.. 22
شکل 3‑1: این تصاویر به عنوان نمونه از میزان آسیب میباشد که برای درک بهتر هر مفهوم آسیب دیدگی……………………………………………………………………………………………………………………………………….54
شکل 4‑1: تصاویر مربوط به بررسی ریختشناسی سلولها پس از تیمار سلول A549 با عصاره باکتریها…………………………………………………………………………………………………………………………………….73
شکل 4‑2: بررسی ریخت شناسی سویه UTMC 863. 74
شکل 4‑3: بررسی ریخت شناسی سویه UTMC 919. 74
شکل 4‑4: بررسی ریخت شناسی سویه UTMC 877. 74
شکل 4‑5: بررسی ریخت شناسی سویه UTMC 676. 75
شکل 4‑6: بررسی ریخت شناسی سویه UTMC 638. 75
شکل 4‑7: مربوط به استخراج DNA اکتینومیستهای منتخب… 76